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非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒-一款阻斷非洲豬瘟的快檢試劑盒#2022資料更新

更新時(shí)間:2022-09-22      點(diǎn)擊次數(shù):1086

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非洲豬瘟不僅呈現(xiàn)高接觸傳染性,同時(shí)具備廣泛的出血性,是一種致死率高達(dá)100%的疫病。

 非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書

(快提核酸擴(kuò)增試劑盒)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)

英文名稱:Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence Probing)

預(yù)期用途

本試劑盒主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV, African Swine Fever Virus)核酸,適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

名稱

50 T

貯藏條件

1、反應(yīng)液A

ImL

-20°C

2、反應(yīng)液B

ImL

3、陽(yáng)性對(duì)照

250μL

4、陰性對(duì)照

250μL

5、PCR反應(yīng)液

850μL

6、酶混合液

150μL

2、需自備材料:生理鹽水、無(wú)菌槍頭、熒光PCR專用反應(yīng)管、記號(hào)筆等。

【操作步驟】

一、樣品制備

1、血液樣品:采集抗凝血(抗凝劑為EDTA)或血清樣品,編號(hào)備用。

2、組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g(黃豆粒大小),眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,再加1mL生理鹽水混勻,4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘,取上清液于滅菌離心管中,編號(hào)備用。

二、DNA提取

取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管,加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻,室溫(20°C左右)靜置3分鐘,加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可,若為抗凝全血,則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

二、PCR擴(kuò)增

1、配液:取出PCR反應(yīng)液、酶混合液,在室溫*融化后,充分混勻,瞬離,可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中,充分混勻,瞬離后按每份20μL分裝使用;或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量,混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應(yīng)管中,剩余試劑立即凍存;(操作過(guò)程要注意避光

2、加樣擴(kuò)增:分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照,混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序:

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

50°C:2分鐘

95 1

 

預(yù)擴(kuò)増

°C:8 秒5

 

95°C:8 秒40

 

 

熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說(shuō)明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C: 5秒 55°C:30秒。) 

【結(jié)果判定】

1、基線和閾值設(shè)定;基線調(diào)整取6-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào),閾值設(shè)定以閾值線剛好超過(guò)陰性對(duì)照檢測(cè) 熒光曲線的最高點(diǎn)為原則。

2、質(zhì)量控制:反應(yīng)結(jié)束后,陰性對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)無(wú)特定的擴(kuò)增曲線,Ct值為>38或無(wú);陽(yáng)性對(duì)照 的Ct值應(yīng)≤30.0,且明顯的擴(kuò)增曲線;否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

3、樣品判定:待檢樣品熒光信號(hào)有指數(shù)型增加,且結(jié)果顯示Ct值<35.0,報(bào)告為陽(yáng)性;未檢測(cè)到Ct 值或Ct值>38或無(wú)明顯擴(kuò)增曲線,則樣品判定為陰性。35≤Ct值≤8時(shí),復(fù)檢一次,重復(fù)結(jié)果為陽(yáng)性者判定為陽(yáng)性,否則判定為陰性。

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書,嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行,在操作過(guò)程中對(duì)時(shí)間、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結(jié)果。

2、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有產(chǎn)格要求。

3、有關(guān)耗材確保潔凈、無(wú)菌,核酸提取完成后盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存。

4、預(yù)混后的試劑應(yīng)盡量在短期內(nèi)使用完畢,戶外使用應(yīng)在加冰袋的泡沫盒保存,每日試驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí) 冷凍保存。

5、對(duì)于熒光PCR管要避免徒手或使用過(guò)的手套接觸,檢測(cè)過(guò)程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

6、凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化,充分混勻,瞬時(shí)離心使液體*沉于管底。

7、樣品、陰性對(duì)照封蓋后,在通風(fēng)環(huán)境添加陽(yáng)性對(duì)照并及時(shí)封蓋,避免組分間及氣溶膠等假陽(yáng)性污染。

8、擴(kuò)增反應(yīng)完畢后的PCR管嚴(yán)禁開蓋,應(yīng)和試驗(yàn)產(chǎn)生的其它廢棄物一起及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行無(wú)害化處理。

【規(guī)格】50頭份/盒。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存,有效期12個(gè)月。

僅供獸醫(yī)診斷使用 

山東天合環(huán)境科技有限公司
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